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商品化細(xì)胞培養(yǎng)基中,為什么谷氨酰胺要后加?

更新時(shí)間:2017-09-01  |  點(diǎn)擊率:2921

   細(xì)胞培養(yǎng)基中,L-谷氨酰胺是一種必需氨基酸,常用濃度在0.7~5 mmol/L之間。對(duì)于一些特定的細(xì)胞,也有相應(yīng)的濃度要求。例如對(duì)于dhfr-CHO細(xì)胞,谷氨酰胺的濃度要達(dá)到4mmol/L時(shí),方可滿足細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。

 

  谷氨酰胺不僅可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源,而且參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。許多商品化細(xì)胞培養(yǎng)基都不含谷氨酰胺。谷氨酰胺作為一種添加劑,常常是在培養(yǎng)基使用之前,再臨時(shí)加進(jìn)去,這是什么原因呢?

 

  圖.谷氨酰胺分子式

 

  原來(lái),谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)基中會(huì)發(fā)生自發(fā)分解。細(xì)胞培養(yǎng)基的儲(chǔ)存溫度越高,存放時(shí)間越久,谷氨酰胺分解的越快。谷氨酰胺分解后還導(dǎo)致氨的形成,而氨對(duì)于細(xì)胞具有毒性。

 

  曾有人做過(guò)測(cè)試,添加了8mM谷氨酰胺的DMEM,在37℃存放7天后,谷氨酰胺的濃度就下降為原先的一半(見(jiàn)下圖)。這也是為什么含谷氨酰胺的培養(yǎng)基要在2-8℃保存的原因。

 

 

  又有人檢測(cè)過(guò)11種商品化培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度,發(fā)現(xiàn)實(shí)際檢測(cè)的谷氨酰胺濃度均在標(biāo)示的濃度之下。有人測(cè)過(guò)4℃下谷氨酰胺的降解速率。也是采用DMEM,培養(yǎng)時(shí)添加葡萄糖20mmol/L, 胎牛血清7%,發(fā)現(xiàn)在4℃下,大約32天后,谷氨酰胺即下降為原先濃度的一半。

 

  同時(shí),對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)說(shuō),谷氨酰胺并非越高越好。當(dāng)初始濃度低于5mmol/L時(shí),谷氨酰胺的利用率大于80%,且初始濃度越低,利用率越高;隨著初始濃度的升高,谷氨酰胺利用率逐漸降低,當(dāng)大于10mmol/L后,利用率急劇降低。

 

  那么,對(duì)于谷氨酰胺的降解,是否有相應(yīng)的解決辦法呢?可以使用谷氨酰胺二肽,如甘氨酰谷氨酰胺、丙氨酰谷氨酰胺等。二肽形式的谷氨酰胺十分穩(wěn)定,不會(huì)發(fā)生水解和氨的毒性堆積,又可被細(xì)胞所利用。因細(xì)胞內(nèi)的氨基肽酶能裂解二肽,逐漸釋放細(xì)胞所能利用的丙氨酸和谷氨酰胺。丙氨酸谷氨酰胺的熱穩(wěn)定性解決了在培養(yǎng)基使用時(shí)才臨時(shí)加入L-谷氨酰胺的問(wèn)題,允許配好的液體培養(yǎng)基在4℃能放更長(zhǎng)時(shí)間。

 

  圖 許多培養(yǎng)基都改為添加L-丙氨酰-L谷氨酰胺(HiGlutaXL?),性能更穩(wěn)定

 

  參考資料

 

  1、Heen,劉一平。 商品細(xì)胞培養(yǎng)基中谷氨酰胺和氨的濃度。《國(guó)外獸醫(yī)學(xué):畜禽傳染病》, 1994 (4) :60-62

 

  2、辛艷,楊艷。 谷氨酰胺在雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)中的降解與代謝。 生物工程學(xué)報(bào), 2001,17(4):478-480

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