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維生素測(cè)定原理及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2018-05-07  |  點(diǎn)擊率:2643

維生素是維持機(jī)體*的一類營養(yǎng),雖然需要量小,但十分重要,一旦缺乏,會(huì)引發(fā)相應(yīng)的維生素缺乏疾病。嬰幼兒食品和乳品中含有天然的維生素,有的也有人工添加。在食品外包裝上,會(huì)要求印有該食品含有哪些營養(yǎng)素及其含量多少(1)。我國的國家食品安全標(biāo)準(zhǔn)中,對(duì)嬰幼兒食品和乳品中的維生素含量也有規(guī)定,如每100千卡的食品中的葉酸含量至少為10.5μg,多不超過50.2μg(2)。之所以限定維生素的高量,是因?yàn)榫S生素?cái)z入過多,也會(huì)引發(fā)一些問題。

 

那么,如何來測(cè)定這些維生素的含量呢?根據(jù)國家出臺(tái)的標(biāo)準(zhǔn),不少維生素含量是采用色譜的方法來測(cè)定。有五種維生素是采用微生物法。它們是葉酸、維生素b12、煙酸、泛酸和生物素。本文重點(diǎn)講述前兩種。以葉酸為例,微生物法的原理是,根據(jù)細(xì)菌對(duì)葉酸的營養(yǎng)需求,在一系列不含葉酸的培養(yǎng)基中從低到高添加已知含量的葉酸以及待測(cè)的食品樣品,在37°C孵育18小時(shí)。因?yàn)橛辛巳~酸,細(xì)菌能生長得很好,培養(yǎng)液發(fā)生渾濁。細(xì)菌越多,培養(yǎng)基就越渾濁,吸光度就越高。通過已知含量的葉酸樣品的吸光度,以及待測(cè)樣品的吸光度,就能確定待測(cè)樣品中的葉酸含量。

 

測(cè)定所用的菌株均有規(guī)定。葉酸為鼠李糖乳桿菌,又稱作干酪乳桿菌鼠李糖亞種(ATCC 7469)(3),維生素b12為萊士曼氏乳酸桿菌(ATCC 7830)(4),均可從ATCC等菌種庫購買。維生素測(cè)定所用的培養(yǎng)基可以自己配,也可以購買商品化的培養(yǎng)基,其來源得是經(jīng)過認(rèn)證的微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家,如HiMedia Laboratories公司,這樣質(zhì)量較為可靠,其培養(yǎng)基組成也符合食品中葉酸和維生素B12測(cè)定的食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)。

 

在測(cè)定中有兩個(gè)非常重要的注意事項(xiàng):一是由于滅菌條件,孵育溫度等因素會(huì)影響標(biāo)準(zhǔn)曲線讀數(shù),并且每次該不會(huì)*一樣,因此每次測(cè)定時(shí)都應(yīng)同時(shí)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、應(yīng)小心避免培養(yǎng)基和玻璃器具遭受污染。雜菌生長會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。同時(shí)應(yīng)使用潔凈的無去污劑的玻璃器具。因?yàn)槿魏紊倭康耐庠次镔|(zhì)都可能導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的偏離。

 

   

    測(cè)定前還需要進(jìn)行菌株的培養(yǎng)和接種菌液的制備。接種菌液來自于儲(chǔ)備菌種。但保存數(shù)周以上的儲(chǔ)備菌種,不能立即用作接種液制備,實(shí)驗(yàn)前宜連續(xù)傳種2-3代以保證細(xì)菌活力。所用培養(yǎng)基也都有商品化的可選。

 

   

    總之,微生物法測(cè)定微生物B12和葉酸等維生素靈敏度高,但也需要注意避免測(cè)定中可能產(chǎn)生的一些問題,這樣才能把實(shí)驗(yàn)做好。

 

注釋:

(1)GB 13432—2013 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 預(yù)包裝特殊膳食用食品標(biāo)簽》

(2)GB10765—2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰兒配方食品》

(3)GB 5009 211-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中葉酸的測(cè)定》

(4)GB 5413 14-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)_嬰幼兒食品和乳品中維生素B12的測(cè)定》

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