近10年來，低血清和無血清Vero細(xì)胞培養(yǎng)基的開發(fā)受到了重視，一些研究機(jī)構(gòu)發(fā)布了自己的研究結(jié)果。其中，無血清細(xì)胞培養(yǎng)基開發(fā)的難度大，因?yàn)闊o血清培養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)胞對(duì)于的pH值、溫度、滲透壓、機(jī)械力和酶處理更為敏感。換用無血清培養(yǎng)基時(shí)，每次傳代常需采用較高的密度接種細(xì)胞，有時(shí)細(xì)胞還需要馴化。性能的細(xì)胞培養(yǎng)基則要求能促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活率和細(xì)胞活力，培養(yǎng)的病毒增殖較快，同時(shí)價(jià)格不過于昂貴。

許多低血清和無血清Vero細(xì)胞培養(yǎng)基以傳統(tǒng)的合成培養(yǎng)基為基礎(chǔ)。有機(jī)構(gòu)研究了DMEM／F12、M199、RPMI1640及MEM∶DMEM／F12四種培養(yǎng)基對(duì)流感病毒增殖的影響1。具體過程為：在上述培養(yǎng)基中分別加入濃度為1.0μg／ml的 TPCK胰酶，配制病毒培養(yǎng)液，調(diào)整pH為8.0。將T-225細(xì)胞培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)成致密單層的SFM-Vero細(xì)胞，經(jīng)0.125%的胰蛋白酶消化后傳代后，置37℃培養(yǎng)36h；洗液洗滌3次，以MOI = 0.1接種H5N1流感病毒，33℃吸附1h；加入病毒培養(yǎng)液，置33℃培養(yǎng)72h，收獲病毒液，測(cè)定血凝效價(jià)。結(jié)果顯示，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間為36 h。以DMEM／F12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基時(shí)，病毒收獲液的血凝效價(jià)均高于其他培養(yǎng)基，M199僅次于DMEM／F12。

又有機(jī)構(gòu)比較了含10%新生牛血清的M199和MEM培養(yǎng)基對(duì)Vero細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。發(fā)現(xiàn)M199顯著好于MEM。M199培養(yǎng)的細(xì)胞活力為94.35%，MEM為80.50%，M199的細(xì)胞濃度為60萬/ml，而MEM為47.5萬/ml2。

由于細(xì)胞培養(yǎng)基的成分較為復(fù)雜，且各個(gè)成分對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)存在一定的協(xié)同作用，故以上結(jié)論僅作一定程度上的參考。DMEM／F-12是DMEM和F-12以1:1的比例混合而成，F(xiàn)-12配方則是以Ham's F-10 培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，提高了膽堿、肌醇、腐胺和幾種氨基酸的濃度，初是用于在無血清的條件下培養(yǎng) CHO 細(xì)胞。M199培養(yǎng)基則常用于疫苗生產(chǎn)、病毒學(xué)以及多種非轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。初的開發(fā)目的是找到一種成分明確的、不含動(dòng)物來源成分的培養(yǎng)基。有報(bào)道將M199改良后，Vero細(xì)胞培養(yǎng)效果優(yōu)于M199，且病毒滴度更高3。

SFRE M199即是一款M199的改良型，初用于原代狒狒腎(Bak)細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持，后用于Vero細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)。它在M199培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加了胰島素、丙酮酸鈉、硫酸鋅，并提高了精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸和葡萄糖的濃度。它還添加了半乳糖，以避免乳酸過度積累，并使pH值在細(xì)胞延長(zhǎng)的維持期內(nèi)，保持在生理范圍。生物科學(xué)公司HiMedia生產(chǎn)有SFRE M199的1型和2型。二者均含有L-谷氨酰胺、半乳糖和葡萄糖。SFRE M199-2（貨號(hào)AT090）含有Earle's鹽，而SFRE M199-1含有Hank鹽。兩種鹽的主要差別在于碳酸氫鈉的水平, 碳酸氫鈉在Eagles (2.2g/L)比在Hanks (0.35g/L) 中高。選用哪種取決于培養(yǎng)環(huán)境中的CO2濃度。

SFRE M199-1與DMEM／F-12的成分作比較，可以發(fā)現(xiàn)，SFRE M199-1不含DMEM／F-12所含有的硫酸銅、硫酸亞鐵、亞油酸、腐胺、硫鋅酸，但含有DMEM／F-12所不含的核苷類成分，如一磷酸腺苷、胸腺嘧啶、尿嘧啶、脫氧核糖、硫酸腺嘌呤等，這些成分都與DNA的合成有關(guān)。另外，在一些共有成分上，兩種培養(yǎng)基的成分濃度互有高低，如SFRE M199-1的甘氨酸、丙氨酸、天門冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、酪氨酸、生物素、丙酮酸鈉的濃度都比DMEM／F-12要高，DMEM／F-12的異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、泛酸鈣、葉酸、吡哆醛鹽酸鹽、肌醇、葡萄糖、次黃嘌呤濃度比SFRE M199-1的成分濃度高。

目前，由于配方保密，關(guān)于Vero細(xì)胞無血清或低血清培養(yǎng)基的具體成分并未*公開。由于改良型M199以及Vero細(xì)胞用SFRE M199培養(yǎng)時(shí)有報(bào)道3、4、5可見想見，SFRE M199取代M199來大規(guī)模培養(yǎng)Vero細(xì)胞，是將來發(fā)展的趨勢(shì)。

HiMedia Laboratories公司是的培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家，其生產(chǎn)通過了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP的質(zhì)量管理體系認(rèn)證。締一生物作為中國(guó)區(qū)代理商，在生物制藥，疫苗生產(chǎn)，科研，臨床治療等領(lǐng)域，提供有可靠的各種培養(yǎng)基及進(jìn)口血清、支原體檢測(cè)試劑等，持續(xù)不斷地為中國(guó)生物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展助力。

參考文獻(xiàn)

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