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三種HiMedia顯色培養(yǎng)基的性能評估

更新時(shí)間:2019-07-18  |  點(diǎn)擊率:1289

2013年,在《環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展期刊》上,埃及國家研究中心水污染研究部及扎加齊克大學(xué)(Zagazig)微生物學(xué)系對HiMedia公司生產(chǎn)的三款顯色培養(yǎng)基的性能進(jìn)行了評估。這3款顯色培養(yǎng)基分別為:

 

1)HiCrome Aureus Agar Base及添加劑

2)M-CP Agar Base及添加劑

3)HiCrome Candida Differential Agar及添加劑

 

它們分別用于檢測水中的金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌和白色念珠菌。研究人員對HiMedia的顯色培養(yǎng)基的靈敏度、特異性和檢測閾限進(jìn)行了評估。他們總共檢測了140個(gè)水的樣品,包括40個(gè)地下水水樣,70個(gè)尼羅河河水樣本,20個(gè)廢水樣本,10個(gè)海水樣本。分離的陽性菌落用PCR方法進(jìn)行了確證。結(jié)果顯示,這些顯色培養(yǎng)基快速、特異、靈敏。

 

研究人員之所以開展這項(xiàng)研究,是因?yàn)楸M管美國APHA于2005年發(fā)布了水和廢水檢驗(yàn)的美國標(biāo)準(zhǔn)方法,但仍存在一些相關(guān)問題,如病原體的難以鑒定,鑒定和分型所花的時(shí)間較長,支出較多。另外,水體需要長期監(jiān)測病原體,這需要較好的監(jiān)測方法和篩查程序。顯色培養(yǎng)基現(xiàn)在已逐漸被接受,并被納入了標(biāo)準(zhǔn)方法。顯色培養(yǎng)基的種類和品牌也越來越多,一個(gè)顯色培養(yǎng)基有時(shí)會采用多種顯色劑,例如針對不同酶的產(chǎn)生綠色和紅色的顯色劑,這樣可形成綠色、紅色和紫色菌落。

 

在HiMedia這三種顯色培養(yǎng)基中,金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基在35-37℃孵育24-48小時(shí),結(jié)果顯示,金黃色葡萄球菌為棕黑色菌落,有透明帶。M-CP培養(yǎng)基為厭氧培養(yǎng)44℃24-48小時(shí),產(chǎn)氣莢膜梭菌菌落為黃色菌落,并在接觸氨氣后30秒內(nèi)變?yōu)榉奂t色。念珠菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)30℃,40-48小時(shí),白色念珠菌為淡綠色平滑菌落。由于均為水樣本,研究人員采用的是膜過濾的方法,濾膜孔徑為0.45m。研究人員用無菌鑷子將濾膜放到濾器上進(jìn)行樣本過濾,再將可能含有致病菌的水樣過濾后的濾膜放到無菌平板上培養(yǎng)。

 

結(jié)果顯示,對于金葡菌顯色培養(yǎng)基的假陰性率和假陽性率均為0, 棕褐色為陰性菌;M-CP培養(yǎng)基上的綠色菌落為陰性菌落;念珠菌顯色培養(yǎng)基上,每90個(gè)菌落中就有9個(gè)為淺綠色陽性菌落,假陰性有1個(gè)(假陰性率為10%),為藍(lán)色菌落,假陽性率則為0。研究人員還發(fā)現(xiàn),不存在非典型菌株顯示典型菌株的典型顏色。終結(jié)論是,金葡和M-CP的靈敏度和特異性均為100%,而念珠菌顯色培養(yǎng)基靈敏度為90%,特異性為100%。

 

研究人員還就140個(gè)不同水樣的檢測結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì),得出顯色培養(yǎng)基對于不同水樣的靈敏度和特異性,見下表:

 

培養(yǎng)基

水類型

陽性菌落

陰性菌落

靈敏度(%)

特異性(%)

(n)

真陽性n(%)

假陽性n(%)

(n)

真陰性n(%)

假陰性n(%)

金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基

地下水

12

11(91.7)

1(8.3)

6

6(100)

0(0)

100

85.7

尼羅河河水

70

67(95.8)

3(4.2)

11

10(90.9)

1(8.9)

98.5

76.9

廢水

20

20(100)

0(0)

13

13(100)

0(0)

100

100

海水

10

9(90)

1(10)

3

3(100)

0(0)

100

75

梭菌顯色培養(yǎng)基

地下水

9

8(88.9)

1(11.1)

5

5(100)

0(0)

100

83.3

尼羅河河水

45

41(91.2)

4(8.8)

10

9(90)

1(10)

97.6

69.2

廢水

20

19(95.0)

1(5))

5

4(80)

1(20)

95

80

海水

5

5(100)

0(0)

2

2(100)

0(0)

100

100

念珠菌顯色培養(yǎng)基

地下水

2

2(100)

0(0)

2

2(100)

0(0)

100

100

尼羅河河水

62

60(96.8)

2(3.2)

8

7(87.5)

1(12.5)

98.4

77.8

廢水

20

19(95.0)

1(5.0)

5

4(80)

1(20)

95

80

海水

13

11(84.6)

2(15.4)

4

4(100)

0(0)

100

66.7

 

 

關(guān)于檢測閾限,研究人員分別用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)菌落摻入到水樣品中測試(具體濃度包括1-20CFU/100mL、20-80CFU/100mL、80-500CFU/100mL)。結(jié)果顯示,三種顯色培養(yǎng)基的對目標(biāo)微生物的檢測閾限均小于20CFU/100mL,檢測閾限很低。

 

作者認(rèn)為,傳統(tǒng)的水樣病原菌的檢測和計(jì)數(shù)方法非常耗時(shí),且需要大量的確證試驗(yàn)。并且,仍然需要快速靈敏的水中病原微生物的檢測手段,特別是對于飲用水。研究人員指出,HiMedia的金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基,性能甚至優(yōu)于市面上的科瑪嘉顯色培養(yǎng)基(科瑪嘉顯色培養(yǎng)基的靈敏度為76%,特異性為90%)。

 

后,作者歸納說:總之, Mediad的這三款顯色培養(yǎng)基非常適合用于常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室日常工作,特別是它不需要任何的確證試驗(yàn)。

 

HiMedia顯色培養(yǎng)基顯色結(jié)果圖(僅供參考)

 


圖1. HiCrome Aureus Agar Base(貨號M1468)

 

 


 

圖2. M-CP Agar Base(貨號M1354)

 


圖3. HiCrome Candida Differential Agar(貨號M1297A)

 

 

參考文獻(xiàn)

 

Raed S. Al-Wasify, Al-Sayed A. Al-Sayed and Mohamed M. Kamel. Sensitivity and Specificity of Chromogenic Media for Detection of Some Pathogens in Water. International Journal of Environment and Sustainability. 2013,2(1):1-9

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