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用于發(fā)酵乳制品中乳酸菌鑒別計(jì)數(shù)的新型顯色培養(yǎng)基

更新時(shí)間:2019-10-21  |  點(diǎn)擊率:1026

酸奶常采用發(fā)酵劑發(fā)酵。發(fā)酵劑中的常見(jiàn)菌為唾液鏈球菌嗜熱亞種和德氏乳桿菌保加利亞亞種。在過(guò)去30年中,酸奶作為益生菌的載體,獲得了越來(lái)越多的重視。

 

益生菌包括乳桿菌屬和雙歧桿菌屬成員。在歸屬到益生菌中的乳酸菌中,常用的是鼠李糖乳桿菌和干酪/副干酪乳桿菌。低劑量為106-107CFU/g。

 

為保證產(chǎn)品品質(zhì),常需鑒別和定量每種菌株。人們因此開(kāi)發(fā)了許多用于酸奶中選擇性乳酸菌和雙歧桿菌計(jì)數(shù)的瓊脂平板培養(yǎng)基和流程。它們大部分是非選擇乳酸菌培養(yǎng)基,有的加入了抗生素以提高選擇性。但大部分對(duì)乳酸菌內(nèi)部鑒別的能力都不強(qiáng)。又如在酸奶中,這些培養(yǎng)基很難對(duì)每種菌株進(jìn)行選擇性計(jì)數(shù)。到目前,只有少數(shù)驗(yàn)證的方法,可以對(duì)如下菌進(jìn)行計(jì)數(shù):雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、檸檬酸發(fā)酵菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌。但當(dāng)存在其他乳酸菌時(shí),這些培養(yǎng)基的鑒別能力比較弱。

 

對(duì)于乳制品中副干酪乳桿菌和鼠李糖乳桿菌計(jì)數(shù)的參比培養(yǎng)基是含1μg/ml的萬(wàn)古霉素。根據(jù)ISO 7889:2003,發(fā)酵菌株保加利亞乳桿菌和嗜酸鏈球菌可在酸性的MRS培養(yǎng)基(pH 5.4±0.1)和M17培養(yǎng)基上計(jì)數(shù)。然而,當(dāng)這些菌種都存在于一個(gè)樣本時(shí),很難對(duì)它們進(jìn)行有效鑒別和計(jì)數(shù)。

 

有一種解決方案是開(kāi)發(fā)顯色培養(yǎng)基。以往顯色培養(yǎng)基的開(kāi)發(fā)*忽視了乳酸菌和益生菌。2016年,法國(guó)科學(xué)家描述了一種方法,能對(duì)發(fā)酵乳中的乳酸菌進(jìn)行選擇性計(jì)數(shù),同時(shí)鑒別鼠李糖乳桿菌、副干酪乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(見(jiàn)下面參考文獻(xiàn)1)。

 

在該研究中,法國(guó)科學(xué)家采用的所有乳桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株均在-80℃MRS肉湯中保存,嗜熱鏈球菌在添加了5.3%DMSO的Elliker培養(yǎng)基中保存。復(fù)蘇后,乳桿菌在MRS肉湯中培養(yǎng),嗜熱鏈球菌在含0.5%乳糖的M17肉湯中生長(zhǎng)。

 

文中培養(yǎng)基HiMedia有提供

貨號(hào)

HiMedia產(chǎn)品

M1029

M17肉湯

M1293

MRS瓊脂,pH5.5

 

在該研究中,研究者對(duì)發(fā)酵劑和標(biāo)準(zhǔn)菌株通過(guò)Biolog表型芯片進(jìn)行了酶活性的選擇和鑒定,發(fā)現(xiàn)β-半乳糖苷酶在嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌種有表達(dá),而而在副干酪乳桿菌種沒(méi)有表達(dá)。β-葡萄糖苷酶裂解在一種副干酪乳桿菌中有表達(dá),在另一種副干酪乳桿菌中沒(méi)有表達(dá)。鼠李糖乳桿菌則同時(shí)表達(dá)β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶。

 

研究者采用了兩種顯色培養(yǎng)基。其中,M2顯色培養(yǎng)基采用了顯色底物X-gal,它可被β-半乳糖苷酶裂解,產(chǎn)生藍(lán)色菌落(對(duì)應(yīng)保加利亞乳桿菌)。在酸性pH值時(shí),該菌落也可能呈現(xiàn)綠色。M1顯色培養(yǎng)基含兩種顯色底物,即Salmon-gal和X-glc,它們可分別被β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶裂解,產(chǎn)生粉色和青綠色。在37℃微需氧孵育條件下,鼠李糖乳桿菌同時(shí)表達(dá)這兩種酶,因而呈現(xiàn)藍(lán)色。嗜熱鏈球菌呈現(xiàn)品紅色。副干酪乳桿菌一種菌種呈現(xiàn)青綠色,另一種呈現(xiàn)無(wú)色。

 

研究者采用M1顯色培養(yǎng)基44℃孵育(這時(shí)副干酪乳桿菌不生長(zhǎng)),對(duì)鼠李糖乳桿菌計(jì)數(shù)。采用含10g/L鼠李糖的M1顯色培養(yǎng)基對(duì)副干酪乳桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。事實(shí)上,在該培養(yǎng)基上,鼠李糖乳桿菌首先使用鼠李糖,而不表達(dá)β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶,導(dǎo)致無(wú)色菌落。

 

值得一提的是,生產(chǎn)商HiMedia公司也提供有乳桿菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào)M2065),用于乳桿菌之間的鑒別。在培養(yǎng)基上嗜酸乳桿菌ATCC 4356(WDCM 00098)呈淡粉色-粉色,鼠李糖乳桿菌ATCC 9595呈現(xiàn)淡綠色,發(fā)酵乳桿菌ATCC 9338呈現(xiàn)黃色,胚牙乳桿菌ATCC 8014 (WDCM 00016)呈現(xiàn)淡綠色-綠色(光暈),乳酸乳球菌乳酸亞種ATCC 19435呈現(xiàn)淡綠色-綠色(光暈)。

 

HiMedia公司是微生物產(chǎn)品生產(chǎn)商,一直致力于微生物培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn),并具有WHO-GMP認(rèn)證、ISO9001,ISO13485認(rèn)證,CE和FDA注冊(cè)登記。其產(chǎn)品已行銷(xiāo)140多個(gè)國(guó)家。

 

締一生物作為HiMedia公司在中國(guó)的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測(cè)領(lǐng)域,一如既往地為您帶來(lái)的服務(wù)。

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