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方法驗(yàn)證用100CFU™支原體標(biāo)準(zhǔn)品

更新時(shí)間:2020-06-11  |  點(diǎn)擊率:1663

支原體核酸檢測(cè)法(常規(guī)PCR、熒光定量PCR)應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥工業(yè)和細(xì)胞治療領(lǐng)域具有很多優(yōu)勢(shì)。和傳統(tǒng)方法比較,它具有①靈敏度高,特異性好。②時(shí)間短,2-3小時(shí)出結(jié)果。③操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn),可替代傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和DNA染色法。

 

歐洲藥典(EP 2.6.7)規(guī)定,支原體核酸法如要替代【指示細(xì)胞培養(yǎng)法】(又稱為DNA染色法),需要驗(yàn)證核酸法靈敏度達(dá)到100CFU/ml,并根據(jù)支原體污染發(fā)生的頻率,推薦選擇下列9種支原體進(jìn)行檢測(cè):

 

  • 精氨酸支原體
  • 口腔支原體
  • 雞敗血支原體
  • 肺炎支原體
  • 關(guān)節(jié)液支原體
  • 發(fā)酵支原體
  • 豬鼻支原體
  • 萊氏無膽甾原體
  • 檸檬螺原體

 

據(jù)小編市場(chǎng)調(diào)查后發(fā)現(xiàn),德國MB公司(全稱Minerva Biolabs)生產(chǎn)的【100CFUTM靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品】廣泛被國內(nèi)外各大藥廠用于支原體核酸法的方法學(xué)驗(yàn)證,被稱為該領(lǐng)域的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

 

【100CFUTM靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品】為凍干粉形式,一共有10種(見下表),其中涵蓋了歐洲藥典(EP 2.6.7)列舉的9個(gè)支原體物種,可用于qPCR和PCR方法的靈敏度以及耐用性驗(yàn)證,使得核酸法可作為DNA染色法的替代方法。

 

貨號(hào)

品名

規(guī)格

NCTC編號(hào)

ATCC編號(hào)

103-1003

精氨酸支原體

標(biāo)準(zhǔn)品3管,

陰性對(duì)照2管/盒

10129

23838

103-2003

口腔支原體

10112

23714

103-3003

雞敗血支原體

10115

19610

103-4003

肺炎支原體

10119

15531

103-5003

關(guān)節(jié)液支原體

10124

25204

103-6003

發(fā)酵支原體

10117

19989

103-7003

豬鼻支原體

10130

17981

103-8003

萊氏無膽甾原體

10116

23206

103-9003

檸檬螺原體

10164

27556

103-1103

唾液支原體

10113

23064

保存:凍干粉在2-8℃保存

 

產(chǎn)品特點(diǎn)

1) 來自英國菌種保藏中心NCTC,為標(biāo)準(zhǔn)支原體株

2) 支原體已滅活,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)室造成污染,保障細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室安全

3)傳代次數(shù)少,支原體無變異

4)產(chǎn)品為凍干粉,保證其穩(wěn)定性

5)分析證書(COA)提供該批次GU:CFU比值(支原體基因組/菌落數(shù)比值)

 

注意

1.使用時(shí),應(yīng)嚴(yán)格遵循說明書操作流程。任何偏離可能會(huì)造成結(jié)果誤差。

2.加入100CFU標(biāo)準(zhǔn)品的樣品不能超濾濃縮,否則會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不可靠。

3.標(biāo)準(zhǔn)品不建議稀釋

 

使用說明:

試劑使用前,先達(dá)到室溫平衡。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品管離心,以收集凍干粉至管底。

2. 每管加入1ml樣品基質(zhì)液。

3. 室溫靜置5分鐘。

4. 渦旋振蕩10秒,再離心5鐘。

5. 使用合適體積的標(biāo)準(zhǔn)品用于DNA抽提。推薦使用MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒(品名:Venor®GeM Sample Preparation Kit)。

6.  使用合適體積的抽提DNA用于PCR擴(kuò)增。

陰性對(duì)照樣品的制備,步驟同上。推薦適當(dāng)重復(fù)試驗(yàn),并推薦使用MB公司的常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒 (品名:Venor®GeM Classic, 貨號(hào)11-1025/-1050/-1100/-1250) qPCR試劑盒 (品名Venor®GeM qEP,貨號(hào)11-9025/-9100/-9250)。

 

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