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研究揭示miR-133a的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制及其在細(xì)胞分化中的作用

更新時(shí)間:2020-12-25  |  點(diǎn)擊率:664

9月9日,學(xué)術(shù)期刊Cell Death & Disease發(fā)表了中國科學(xué)院生物物理研究所衛(wèi)濤濤課題組與美國Creighton大學(xué)屠亞平課題組的合作論文,這是衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組長期合作所取得的又一成果。研究人員發(fā)現(xiàn),miR-133a表達(dá)的上調(diào)促進(jìn)了線粒體生物發(fā)生和肌細(xì)胞分化,并進(jìn)一步通過“定向染色質(zhì)構(gòu)象捕獲”(CAPTURE)技術(shù)找到了調(diào)控miR-133a表達(dá)的上游調(diào)控因子KAP1,從而加深了對miR-133a轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制及重要功能的了解。

microRNA(miRNA)在多種生理及病理生理過程中起著重要的調(diào)控作用。在前期工作中,衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組密切合作,通過分子、細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明,TGF-β1誘導(dǎo)表達(dá)的miR-133a可通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)的方式作用于TGF-β1受體及其效應(yīng)分子,負(fù)調(diào)控TGF-β1信號(hào)通路,從而抑制甚至部分逆轉(zhuǎn)特發(fā)性肺纖維化(IPF)的進(jìn)程,相關(guān)論文于2019年9月11日發(fā)表于Cell Death & Disease雜志。

鑒于miR-133a的重要生理及病理生理學(xué)作用,探明其調(diào)控機(jī)制將對治療肺纖維化等相關(guān)疾病提供重要的線索。衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組進(jìn)一步以成肌細(xì)胞分化過程中miR-133a動(dòng)態(tài)表達(dá)為模型,使用基于CRISPR/Cas9的CAPTURE技術(shù),結(jié)合高通量測序及生物信息學(xué)分析,系統(tǒng)研究了miR-133a表達(dá)的調(diào)控機(jī)制,發(fā)現(xiàn)KAP1相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合物可抑制C2C12成肌細(xì)胞中miR-133a的表達(dá);敲低KAP1可增加miR-133a的表達(dá),此過程伴隨線粒體生物發(fā)生和C2C12成肌細(xì)胞分化;miR-133a的上調(diào)足以誘導(dǎo)線粒體生物發(fā)生和C2C12成肌細(xì)胞分化,而miR-133a抑制劑則顯著抑制細(xì)胞分化。

該研究*使用CAPTURE技術(shù)鑒定了細(xì)胞分化過程中調(diào)控miR-133a表達(dá)的重要因子,為理解microRNA的調(diào)控機(jī)制提供了新思路。

采用Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清,透析過濾去除10000D以下小分子(如次黃嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子對細(xì)胞產(chǎn)生干擾。適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)(例如同位素標(biāo)記特定小分子,并加入到培養(yǎng)體系中,以研究細(xì)胞代謝),也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用。

儲(chǔ)存條件

-20°C凍存。

胎牛血清*解凍后,應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。

若置于4°C的血清,應(yīng)在一周內(nèi)用完。

為保證細(xì)胞培養(yǎng)的效果,血清和培養(yǎng)基的配置,應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液,應(yīng)于一周內(nèi)用完。

血清避免反復(fù)凍融,避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過久,否則會(huì)破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。

 

血清融化 專業(yè)方法:

目的;更好保留血清中活性成分,使細(xì)胞培養(yǎng)更穩(wěn)定。

推薦血清廠家 專業(yè)融化方法(此方法通用,適用于所有種類的血清):

 

注意:

♦ 在水浴過程中,血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動(dòng)瓶身,使血清混勻,但搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫!

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