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不同碳水化合物對正常人腸道菌群體外模擬效果的比較研究

更新時間:2021-01-28  |  點(diǎn)擊率:873

為了比較不同碳水化合物對正常人腸道菌群體外模擬效果的影響,找出適合腸道菌群體外模擬的條件,研究腸道微生物體外制備方法,范彬, 尹業(yè)師, 孫剛, 等采集3名正常志愿者的糞便樣品,利用以淀粉為主要碳源的培養(yǎng)基VI和以淀粉+多糖為主要碳源的培養(yǎng)基XP,在體外模擬發(fā)酵模型中對其菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬培養(yǎng)。通過提取發(fā)酵液細(xì)菌基因組DNA,運(yùn)用PCR-變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)和16S rRNA基因高通量測序來評價模擬系統(tǒng)的穩(wěn)定性和模擬效果,通過測定發(fā)酵液短鏈脂肪酸含量來推斷細(xì)菌代謝情況。

不同碳水化合物對正常人腸道菌群體外模擬效果的比較研究

 

結(jié)果顯示,體外發(fā)酵模型連續(xù)運(yùn)行8 d后,3名志愿者的發(fā)酵液細(xì)菌PCR-DGGE條帶一致,不同培養(yǎng)基存在特異的細(xì)菌條帶。細(xì)菌16S rRNA基因高通量測序結(jié)果表明,3名志愿者的糞便樣品主要由4個細(xì)菌門組成,分別是擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和放線菌門。在考慮細(xì)菌百分含量的情況下,VI培養(yǎng)基對3名志愿者腸道菌群的模擬相似性是0.847、0.825、0.968,XP培養(yǎng)基為0.927、0.926、0.836。當(dāng)不考慮細(xì)菌百分含量,只考慮細(xì)菌種類時,VI培養(yǎng)基對3名志愿者腸道菌群的模擬相似性是0.553、0.580、0.623,XP培養(yǎng)基為0.617、0.520、0.574。VI和XP培養(yǎng)基模擬效果存在個體差異,VI培養(yǎng)基對志愿者3菌群的模擬效果更好,XP培養(yǎng)基對志愿者1、2菌群的模擬效果更好。VI和XP培養(yǎng)基均能較好地模擬擬桿菌和毛螺旋菌屬細(xì)菌的生長,但VI和XP培養(yǎng)基中也存在各自特異生長的細(xì)菌。在發(fā)酵罐內(nèi)檢測到短鏈脂肪酸的含量是15~35 mmol/L,產(chǎn)生多的是丁酸和丙酸。

發(fā)酵系統(tǒng)可用于腸道細(xì)菌的模擬培養(yǎng),不同碳水化合物對腸道細(xì)菌的體外模擬效果有不同影響,能體外模擬培養(yǎng)出相同的細(xì)菌,也有在各培養(yǎng)基中特異性生長的細(xì)菌,但對3名志愿者腸道細(xì)菌模擬相似性均在80%以上。

 

特點(diǎn)

1.內(nèi)控對照已加在預(yù)混液中,無需另外配置,使用便捷。

2.高特異性,一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種(包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體)。與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。

3.高靈敏度,50個基因組DNA/每個反應(yīng)。

4.有相應(yīng)配套的支原體

基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA,便于特異性驗(yàn)證。

5.有相應(yīng)配套的支原體定量標(biāo)準(zhǔn)品,便于后定量檢測。

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