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細胞培養(yǎng)的具體步驟

更新時間:2021-12-27  |  點擊率:977

科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉(zhuǎn)染細胞等。

那么細胞培養(yǎng)時都要?步驟呢?


一、常用設(shè)備

1. 準(zhǔn)備室的設(shè)備

單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜(放置未消毒物品)、儲品柜(放置消毒過的物品)、包裝臺。配液室的設(shè)備:扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(測量培養(yǎng)用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。

2. 培養(yǎng)室的設(shè)備

液氮罐、儲品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱(-80℃)、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(書寫實驗記錄)。

3. 必須放在無菌間的設(shè)備

離心機(收集細胞)、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養(yǎng)物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱(放置serum和培養(yǎng)用液)。

二、無菌操作

(一)無菌室的滅菌

1.定期打掃無菌室:每周打掃一次,先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等,然后用3‰來蘇爾或新潔爾滅或0.5%過氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱(培養(yǎng)箱)滅菌:先用3‰新潔爾滅擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸,再用紫外燈照射。

3.實驗前滅菌:打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘。

4.實驗后滅菌:用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。

(二)實驗人員的無菌準(zhǔn)備

1.肥皂洗手。

2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋。

3.用75%酒精棉球擦凈雙手。

(三)無菌操作的演示

1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面。

2.靠近酒精燈火焰操作。

3.器皿使用前必須過火滅菌。

4.繼續(xù)使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處,使用時仍要過火。

5.各種操作要靠近酒精燈,動作要輕、準(zhǔn)確,不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。

6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管,防止交叉污染。

三、器械的清洗和消毒

(一)玻璃器械洗消

新的玻璃器皿的洗消

1.自來水刷洗,除去灰塵。

2.烘干、泡鹽酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。

3.刷洗、烘干:12小時后立即用自來水沖洗,再用洗滌劑刷洗,自來水沖干凈后用烤箱烘干。

4.泡酸、清洗:用清潔液(重鉻酸鉀120g:濃硫酸200ml:蒸餾水1000ml)浸泡12小時,然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次,最后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。

5.烘干、包裝:洗干凈后先烘干,然后用牛皮紙(油光紙)包裝。

6.高壓消毒:包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子,打開開關(guān)和安全閥,當(dāng)蒸氣成直線上升時,關(guān)閉安全閥,當(dāng)指針指向15磅時,維持20-30分鐘。

7.高壓消毒后烘干


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