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如何提高細胞培養(yǎng)時的存活率

更新時間:2022-01-25  |  點擊率:1098

細胞培養(yǎng)技術的發(fā)現(xiàn),使得很多研究不必局限于在動物或人體內進行,試驗環(huán)境更為簡單,目的更為明確,如:細胞內活動的基礎研究;細胞與細胞相互作用;細胞與環(huán)境間的相互作用;遺傳學與細胞轉化;細胞產物和分泌等等。

細胞培養(yǎng)技術的發(fā)展很大程度上是由醫(yī)學研究的需求而促進的,如:抗病毒疫苗的研究,腫瘤發(fā)生及治療的研究;基因重組技術;單克隆抗體技術;組織工程;染色體分析等體外檢測技術,以及體外輔助生殖技術。


在細胞培養(yǎng)過程中,除了細胞本身的生長特性,環(huán)境也會影響細胞的狀態(tài)。

1:細胞生長的附著物或支持物性質(如:細胞培養(yǎng)瓶/板或細胞培養(yǎng)載體);

2:細胞培養(yǎng)基的理化性質和成分;

3:氣相成分;

4:培養(yǎng)溫度等。合適的培養(yǎng)環(huán)境才可以使細胞表現(xiàn)出特定的功能。

無論是原代培養(yǎng)還是細胞系的傳代培養(yǎng),都要定期更換培養(yǎng)基。而傳代培養(yǎng)過程中,細胞通常遵循一種標準的方式生長:接種后經過一段潛伏期進入指數(shù)生長期,即對數(shù)期,在這一階段細胞的生長狀態(tài)最好。此后細胞密度將逐漸增加到鋪滿整個細胞培養(yǎng)板/皿/瓶有效基質,當細胞濃度超出培養(yǎng)基的能力時,細胞生長速度將大大減慢,這時可以選擇更換培養(yǎng)液或進行分瓶培養(yǎng),也就是傳代。懸浮細胞培養(yǎng)由于機械力保持細胞在懸浮狀態(tài),培養(yǎng)和傳代過程也不需要胰蛋白酶消化,但是無論哪種情況,都有相似的生長周期。

細胞培養(yǎng)成功的關鍵因素:

1.要保證無菌,包括無菌操作,無菌環(huán)境.槍頭等要及時滅菌,培養(yǎng)瓶,移液管最好使用一次性的,如果你的細胞比較不好養(yǎng),最好使用一次性的.
2.要傳代的時候細胞傳代的數(shù)量不能太少,否則細胞不容易養(yǎng)活.另外,傳代不要過度頻繁,即使是腫瘤細胞.
3.不要經常用胰酶消化細胞,且消化時間不要過長.
4.根據(jù)細胞生長情況,即使更換新鮮培養(yǎng)基.
5.血清一般要凍存在-20攝氏度,用的時候在4攝氏度融化,不要反復凍存,最好用10ml的離心管分裝使用.


科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉染細胞等。


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