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您了解支原體qPCR法嗎?

更新時(shí)間:2022-03-14  |  點(diǎn)擊率:672

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,因而細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。細(xì)胞培養(yǎng)中常遇見(jiàn)的有細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說(shuō)起支原體污染,估計(jì)細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)就開(kāi)始犯愁了,細(xì)胞培養(yǎng)的老手都知道,支原體污染非常不易察覺(jué)。有的實(shí)驗(yàn)室被支原體污染后,如果不進(jìn)行有效*的支原體清除,該實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)很難進(jìn)行下去,細(xì)胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑,無(wú)法進(jìn)行正常實(shí)驗(yàn),有的實(shí)驗(yàn)室甚至只能指望換細(xì)胞間。那么怎樣才能有效檢測(cè)并清除支原體污染呢?

支原體qPCR法介紹:

熒光定量PCR法(qPCR):是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上,將『針對(duì)支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記,使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件,進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。

優(yōu)點(diǎn):①靈敏度高、特異性強(qiáng)。

②時(shí)間短,2-3小時(shí)出結(jié)果。

③檢測(cè)結(jié)果可定量。

④操作簡(jiǎn)便。

缺點(diǎn):①對(duì)于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。(可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證)

②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同),需謹(jǐn)慎選擇,盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

『支原體qPCR檢測(cè)試劑盒』介紹

德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(均為探針?lè)z測(cè)),依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別,

分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。

此兩類(lèi)試劑盒較其他廠家同類(lèi)產(chǎn)品,具有以下*的優(yōu)點(diǎn):

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀察。

(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性,其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性,無(wú)交叉反應(yīng))

 

您了解支原體qPCR法嗎?

 

 

特點(diǎn)

1. 內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2. 高特異性,一次檢測(cè)即可涵蓋所有常見(jiàn)易感染細(xì)胞的支原體物種(包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體)。與細(xì)菌和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

3. 高靈敏度,zui低檢測(cè)限可達(dá)到≤10CFU/ml。

4. 有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA,便于特異性驗(yàn)證。

5.有相應(yīng)配套的支原體絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品,便于最后定量檢測(cè)。

 

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