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細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)

更新時(shí)間:2022-04-18  |  點(diǎn)擊率:567

細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù),即在無(wú)菌條件下,從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞,模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件,讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長(zhǎng)和繁殖的方法。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞,以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。

細(xì)胞真的很脆弱,就像小嬰兒一樣,需要你無(wú)微不至的關(guān)懷。

培養(yǎng)細(xì)胞之前,你需要做好這些準(zhǔn)備:

1、耗材的處理、

玻璃器皿的清洗,對(duì)于玻璃器皿(細(xì)胞瓶、裝營(yíng)養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干凈(注意死角),然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水沖洗數(shù)遍,除去殘留酸液。瓶子之類,沖洗過(guò)程要使勁搖晃。

2、試劑的配置

試劑配置,細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

3、無(wú)菌檢驗(yàn)

無(wú)菌檢驗(yàn),主要采用過(guò)濾除菌:如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌:如 PBS、D-Hank's等。

不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求是不同的,要根據(jù)自己的細(xì)胞要求使用。

細(xì)胞培養(yǎng)中最重要的步驟——無(wú)菌操作

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,超凈臺(tái)以紫外燈照射 30 分鐘滅菌,以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面,并開(kāi)啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。

每次操作只處理一株細(xì)胞株,避免細(xì)胞間交叉污染。

實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),再次以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。實(shí)驗(yàn)用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無(wú)菌區(qū)域,一般不要再邊緣區(qū)域操作。

細(xì)胞培養(yǎng)后期——定期觀察

你最好做到每天都去探望探望它們,看看他們的成長(zhǎng)情況

1、檢查培養(yǎng)液顏色與透明度的變化,顏色變黃,說(shuō)明PH值下降;變紅或紫紅色,說(shuō)明PH值上升,細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、死亡,一般生長(zhǎng)穩(wěn)定的細(xì)胞2-3天換液一次,生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞可3-4天換液一次。

2、觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底的80%,應(yīng)及時(shí)傳代。

3、觀察細(xì)胞形態(tài)變化,細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓清晰為佳。

4、注意微生物污染,常常出現(xiàn)培養(yǎng)液混濁,液體內(nèi)漂菌絲或細(xì)胞菌,不僅僅指微生物,包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物及細(xì)胞。

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實(shí)驗(yàn)人對(duì)于新批次血清,應(yīng)認(rèn)真審閱《檢測(cè)報(bào)告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測(cè)報(bào)告》,可登陸“締一生物"網(wǎng)站,留言技術(shù)部,得到免費(fèi)幫助。)


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