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原代細胞培養(yǎng)小技巧(二)

更新時間:2022-05-24  |  點擊率:809

原代細胞培養(yǎng)是細胞實驗中較為重要的一環(huán),同時該實驗也具有一定的難度,需要掌握一些小技巧,才能更快上手、更好操作、更不容易“翻車”,今天我們就來一起總結(jié)一下,原代細胞培養(yǎng),都有哪些注意事項。

 

常見的原代細胞類型

上皮細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、角質(zhì)形成細胞、黑色素細胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞、干細胞。

 

原代細胞的優(yōu)缺點

 

原代細胞VS細胞系

能夠培養(yǎng)的細胞系,已經(jīng)獲得了通過隨機突變或通過修飾(例如癌癥基因的人工表達)轉(zhuǎn)化的癌細胞系中的無限增殖(永生化)的能力。連續(xù)細胞系通常比原代細胞更堅固,更易于操作。它們具有無限的增長潛力,是獲取基本信息的快速簡便方法。使用連續(xù)細胞系的一些缺點是它們是經(jīng)過基因修飾/轉(zhuǎn)化的,可以改變生理特性并且不代表體內(nèi)狀態(tài),并且隨著時間的流逝,這可能會進一步改變。

 

而原代培養(yǎng)得來的細胞不具備無限分裂的能力,但可以相對更好地還原生物體內(nèi)細胞生長狀況。

 

倍增和代數(shù)有什么區(qū)別?

倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍,通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出,傳代培養(yǎng)過程的次數(shù),傳代培養(yǎng)的目的,是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

 

原代細胞培養(yǎng)過程中可能存在的錯誤

污染:轉(zhuǎn)移主要組織進行培養(yǎng)時需要注意避免污染。

 

pH值變化:這可能是由于培養(yǎng)基中的鹽分不正確,細菌或真菌污染,碳酸氫鹽緩沖液不足,二氧化碳張力不正確等引起的。

 

粘附性不足(細胞不貼壁):培養(yǎng)基中不含附著因子(attachment factors)或附著因子不足,培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基污染,細胞被胰蛋白酶過度消化等。

 

生長緩慢:原因包括培養(yǎng)基的pH值變化,必需的促進生長的成分/因子耗盡,低污染,試劑儲藏不當?shù)取?/span>

 

細胞死亡:溫度波動,二氧化碳含量過低,在融化和/或冷凍保存過程中細胞受損,有毒代謝產(chǎn)物濃度增加,培養(yǎng)基中的滲透壓失衡導(dǎo)致細胞存活率降低。

 

沉淀(pH不變):由于使用了冷凍培養(yǎng)基,在pH不變的培養(yǎng)基中可能會出現(xiàn)沉淀,殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時可能會沉淀出粉末狀的培養(yǎng)基成分。

 

細胞結(jié)塊(細胞不貼壁且結(jié)塊):懸浮細胞可能由于鈣、鎂離子的存在或細胞裂解及DNA釋放(過度用蛋白水解酶消化)而結(jié)塊。

 

誘導(dǎo)變異性:多種試劑和培養(yǎng)基會誘導(dǎo)原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異,研究者的處理手法也可能導(dǎo)致原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異。

 

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻:

 

  • 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。

  • 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

  • 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。

  • 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

  • 起酸堿度緩沖液作用。

  • 提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

  • 參與細胞凍存。

  • ......

 

一款優(yōu)質(zhì)的血清,能成為細胞實驗的“*輔助”。

 

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