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細胞復(fù)蘇的秘密武qi!

更新時間:2022-06-09  |  點擊率:618

細胞培養(yǎng)是指細胞在體外的培養(yǎng)技術(shù),即在無菌條件下,從機體中取出組織或細胞,模擬機體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件,讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。通過細胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細胞,以便于研究細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機制。

細胞真的很脆弱,就像小嬰兒一樣,需要你無微不至的關(guān)懷。

細胞培養(yǎng)的開始,就是復(fù)蘇細胞。如何有條不紊地讓細胞從沉睡中蘇醒?今天就來給大家總結(jié)幾個實用小技巧,快點來get!


細胞復(fù)蘇流程:


1、將凍存的細胞從液氮罐中取出,立即放入37°C的水浴中進行融化,輕柔晃動,加速融化,直到小瓶中只剩下一小塊冰,時長應(yīng)控制在1min中;


2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉(zhuǎn)移無菌操作臺中,打開瓶蓋前,用酒精燈火焰對瓶口進行消毒;


3、將預(yù)加熱的新鮮*培養(yǎng)基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中,加入適量濃度和體積的*培養(yǎng)基,輕柔混合均勻;


4、200 × g左右細胞懸浮液離心5-10分鐘。實際的離心速度和持續(xù)時間因細胞類型而異。棄掉上清,加入新鮮*培養(yǎng)基重懸細胞,并將其轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中。


細胞解凍流程圖


注意事項:


1、液氮溫度低,小心低溫對人造成的傷害,在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時存在爆炸的風(fēng)險,因此,取出凍存管的時候,要做好個人防護。


2、通常細胞集中儲藏在液氮中,取出時應(yīng)迅速,避免溫差對其他凍存細胞造成影響。


3、復(fù)蘇細胞的核心技術(shù),簡而言之就是快融,將在37°C水浴中快速解凍冷凍細胞(< 1分鐘。


4、解凍時,凍存管先放入無菌一次性PE手套中,再放入水中融化,避免污染也方便操作。


5、用預(yù)熱過的培養(yǎng)基慢慢稀釋解凍的細胞。


6、解凍細胞后,在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)時,應(yīng)盡量維持高密度,以提高細胞存活率。


7、注意無菌操作,避免細胞發(fā)生污染。


細胞高效解凍的另一個成功秘訣,就是選擇一款優(yōu)質(zhì)血清!


Ausbian進口特級胎牛血清,有以下優(yōu)點,可以大程度地幫助實驗者提高細胞實驗成功率:


1. 精選內(nèi)毒素更低批次(≤3EU/ml)。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

實驗室有些細胞,需要長期培養(yǎng)、長期凍存,或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會經(jīng)常或長時間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長久對細胞的毒性影響。

2. 新批次在試用前,提供試用服務(wù),養(yǎng)細胞更放心。

3. 每個批次產(chǎn)量800-2000升,試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定,保證大多數(shù)項目兩年不需換批次,細胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

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