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支原體DNA抽提Kit特點及操作步驟

更新時間:2022-06-23  |  點擊率:593

在細胞培養(yǎng)過程中,病原污染可以算得上是科研工作者的噩夢了。其中支原體污染更像是一個無形的殺手,時刻威脅著細胞的安全。

細菌真菌污染還有跡可循,起碼顯微鏡下能夠清晰地看到,但是支原體個子小,不易觀察,由于繁殖速度比較慢,前期感染幾乎沒有癥狀。經(jīng)常稍不留意,就中了支原體的「陰招」。統(tǒng)計顯示,全球大約有60%左右的細胞培養(yǎng)存在或曾經(jīng)存在過支原體污染。

那到底如何判斷細胞究竟有沒有感染支原體?今天我們就來從原理上深扒一下,網(wǎng)傳的肉眼判斷是否感染支原體大法到底正不正確!

支原體感染癥狀1:細胞生長緩慢甚至死亡?

被廣泛使用的細胞培養(yǎng)基,不僅給細胞提供支持和養(yǎng)分,對于支原體而言,也是天堂一般的存在。

適宜的溫度(37℃)

合適的PH(7-8之間都可生存)

充足的養(yǎng)分(各種氨基酸、生長因子等)

一定的二氧化碳(5%左右)

與細胞培養(yǎng)高度重合的培養(yǎng)條件,注定了支原體要與細胞共同競爭有限的生存資源。

早有研究表明[1],一些支原體(包括最為常見的人型支原體、發(fā)酵支原體、精氨酸支原體等),通過精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來供能。當這些支原體混入細胞培養(yǎng)體系后,會與細胞爭搶精氨酸,導(dǎo)致細胞「吃不飽飯」,出現(xiàn)營養(yǎng)不良的癥狀:生長速率異常、活力下降、易脫壁等等。

如果你培養(yǎng)的細胞出現(xiàn)以下情況,基本可以確定是支原體感染了,不放心的話可以再配合支原體檢測試劑(檢測神器幫你揪出培養(yǎng)基中的支原體?。┻M一步確認。

細胞被支原體污染后的表現(xiàn)

①細胞生長緩慢

②細胞變形

③培養(yǎng)基中碎片增加

④細胞易聚團

⑤鏡下觀察有小黑點

⑥培養(yǎng)基提前變色

除了影響細胞活力,支原體還會給細胞帶來的幾百種基因表達的改變,包括編碼受體、離子通道、生長因子的基因和癌基因等方面[4]。它包含高度富含免疫原性的脂蛋白,可以錨定在胞膜的外表面,被TLR2等免疫細胞的受體識別。激活NF-kB途徑,進一步導(dǎo)致細胞活化[5],偏離最終的實驗結(jié)果。

支原體DNA抽提Kit特點及操作步驟

特點

1.符合歐洲藥典的要求。

2.從細胞上清和生物制品中,均可分離支原體DNA,全程只需30分鐘。

3.洗脫DNA純度高,體積50μl,保證PCR最大的靈敏。


操作步驟


支原體DNA抽提Kit特點及操作步驟



試劑盒組分

Spin columns(核酸純化?。ollection tubes(收集管)、Conditioner液、Binding Buffer E液、Buffer A1液、Buffer A2液、Buffer E液


儲存條件

室溫


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