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細(xì)胞復(fù)蘇是有小竅門的

更新時(shí)間:2022-08-05  |  點(diǎn)擊率:605

 

細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù),即在無菌條件下,從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞,模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件,讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長(zhǎng)和繁殖的方法。通過細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞,以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。

細(xì)胞真的很脆弱,就像小嬰兒一樣,需要你無微不至的關(guān)懷。

細(xì)胞培養(yǎng)的開始,就是復(fù)蘇細(xì)胞。如何有條不紊地讓細(xì)胞從沉睡中蘇醒?今天就來給大家總結(jié)幾個(gè)實(shí)用小技巧,快點(diǎn)來get!

 

細(xì)胞復(fù)蘇流程:

 

1、將凍存的細(xì)胞從液氮罐中取出,立即放入37°C的水浴中進(jìn)行融化,輕柔晃動(dòng),加速融化,直到小瓶中只剩下一小塊冰,時(shí)長(zhǎng)應(yīng)控制在1min中;

 

2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉(zhuǎn)移無菌操作臺(tái)中,打開瓶蓋前,用酒精燈火焰對(duì)瓶口進(jìn)行消毒;

 

3、將預(yù)加熱的新鮮*培養(yǎng)基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中,加入適量濃度和體積的*培養(yǎng)基,輕柔混合均勻;

 

4、200 × g左右細(xì)胞懸浮液離心5-10分鐘。實(shí)際的離心速度和持續(xù)時(shí)間因細(xì)胞類型而異。棄掉上清,加入新鮮*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,并將其轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中。

 

細(xì)胞解凍流程圖

 

注意事項(xiàng):

 

1、液氮溫度低,小心低溫對(duì)人造成的傷害,在液相中儲(chǔ)存的冷凍瓶在解凍時(shí)存在爆炸的風(fēng)險(xiǎn),因此,取出凍存管的時(shí)候,要做好個(gè)人防護(hù)。

 

2、通常細(xì)胞集中儲(chǔ)藏在液氮中,取出時(shí)應(yīng)迅速,避免溫差對(duì)其他凍存細(xì)胞造成影響。

 

3、復(fù)蘇細(xì)胞的核心技術(shù),簡(jiǎn)而言之就是快融,將在37°C水浴中快速解凍冷凍細(xì)胞(< 1分鐘。

 

4、解凍時(shí),凍存管先放入無菌一次性PE手套中,再放入水中融化,避免污染也方便操作。

 

5、用預(yù)熱過的培養(yǎng)基慢慢稀釋解凍的細(xì)胞。

 

6、解凍細(xì)胞后,在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)時(shí),應(yīng)盡量維持高密度,以提高細(xì)胞存活率。

 

7、注意無菌操作,避免細(xì)胞發(fā)生污染。

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