細胞培養(yǎng)的開始，就是復(fù)蘇細胞。如何有條不紊地讓細胞從沉睡中蘇醒？今天就來給大家總結(jié)幾個實用小技巧，快點來get！

細胞復(fù)蘇流程：

1、將凍存的細胞從液氮罐中取出，立即放入37°C的水浴中進行融化，輕柔晃動，加速融化，直到小瓶中只剩下一小塊冰，時長應(yīng)控制在1min中；

2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉(zhuǎn)移無菌操作臺中，打開瓶蓋前，用酒精燈火焰對瓶口進行消毒；

3、將預(yù)加熱的新鮮完quan培養(yǎng)基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中，加入適量濃度和體積的完quan培養(yǎng)基，輕柔混合均勻；

4、200 × g左右細胞懸浮液離心5-10分鐘。實際的離心速度和持續(xù)時間因細胞類型而異。棄掉上清，加入新鮮完quan培養(yǎng)基重懸細胞，并將其轉(zhuǎn)移到適當?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中。

細胞解凍流程圖

注意事項：

1、液氮溫度低，小心低溫對人造成的傷害，在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時存在爆炸的風(fēng)險，因此，取出凍存管的時候，要做好個人防護。

2、通常細胞集中儲藏在液氮中，取出時應(yīng)迅速，避免溫差對其他凍存細胞造成影響。

3、復(fù)蘇細胞的核心技術(shù)，簡而言之就是快融，將在37°C水浴中快速解凍冷凍細胞(< 1分鐘）。

4、解凍時，凍存管先放入無菌一次性PE手套中，再放入水中融化，避免污染也方便操作。

5、用預(yù)熱過的培養(yǎng)基慢慢稀釋解凍的細胞。

6、解凍細胞后，在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)時，應(yīng)盡量維持高密度，以提高細胞存活率。

7、注意無菌操作，避免細胞發(fā)生污染。

細胞高效解凍的另一個成功秘訣，就是選擇一款優(yōu)質(zhì)血清！

Ausbian進口特級胎牛血清，有以下優(yōu)點，可以盡可能幫助實驗者提高細胞實驗成功率：

1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

實驗室有些細胞，需要長期培養(yǎng)、長期凍存，或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的，血清會經(jīng)常或長時間作用于細胞。為保證細胞的健康，都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清，以避免內(nèi)毒素長久對細胞的毒性影響。

2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細胞更放心。

3. 每個批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項目兩年不需換批次，細胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

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