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PCR怎樣才能『準(zhǔn)確靈敏且穩(wěn)定』?這些關(guān)鍵點(diǎn)需注意!

更新時(shí)間:2023-05-23  |  點(diǎn)擊率:705
PCR(其中包含qPCR)是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù),作為一類基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn),具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
除了常見的基因表達(dá)分析這類理論研究中,需要用到PCR技術(shù),在臨床檢測、藥物生產(chǎn)過程監(jiān)控等流程中,也會(huì)用到PCR技術(shù)。其中,用于細(xì)胞治療、疫苗生產(chǎn)等過程支原體檢測的,德國Minerva Biolabs支原體檢測試劑盒,也是基于qPCR的原理。
PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、靈敏性和穩(wěn)定性,很大程度上會(huì)影響后續(xù)其他實(shí)驗(yàn)。在生物藥項(xiàng)目申報(bào)等過程中,如果支原體檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差,將有可能導(dǎo)致項(xiàng)目申報(bào)的失敗。因此,保證PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、靈敏性和穩(wěn)定性十分重要。
Point 1 清潔實(shí)驗(yàn)環(huán)境
PCR實(shí)驗(yàn)造成DNA大量合成,常常會(huì)給實(shí)驗(yàn)室?guī)砗怂嵛廴?。由于核酸產(chǎn)物不能自動(dòng)降解,因此DNA污染會(huì)不斷積聚。
由于PCR本身的特點(diǎn),少量污染的DNA或RNA分子也會(huì)被檢測出來,從而造成實(shí)驗(yàn)偏差。
傳統(tǒng)的紫外照射,僅對500bp以上長片段有效,對短片段效果不大,因此,該方法對祛除DNA污染并不理想。那么問題來了,該如何有效清除核酸污染?
使用德國Minerva Biolabs公司(簡稱MB)的PCR污染祛除劑PCR Clean™。
PCR Clean™有噴霧和濕巾兩種樣式,在1分鐘之內(nèi)即可有效地祛除核酸污染(對質(zhì)粒、基因組和DNA、RNA擴(kuò)增片段均有效),適合各種實(shí)驗(yàn)臺(tái)、操作區(qū)域、設(shè)備和實(shí)驗(yàn)耗材,高效迅速,使用方便。

Point 3 合適的樣品制備
合適的樣品制備,包括DNA提取和純化,可以幫助防止可能干擾PCR擴(kuò)增的污染物或抑制劑的引入。
在檢測細(xì)胞中是否含有支原體時(shí),除支原體檢測試劑盒Venor®Gem qEP以及標(biāo)準(zhǔn)品外,建議配套使用德國MB支原體DNA提取試劑盒,保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。


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