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原代細(xì)胞培養(yǎng),這個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)一定要牢記!

更新時(shí)間:2023-06-04  |  點(diǎn)擊率:740

原代細(xì)胞是一類細(xì)胞的統(tǒng)稱,具體是指從來(lái)源于活體組織,通過(guò)特定的分離方法制備得來(lái)的比較原始的一類細(xì)胞。體外培養(yǎng)原代細(xì)胞是現(xiàn)代生命科學(xué)研究生物中,十分重要的實(shí)驗(yàn)手段之一。通過(guò)原代細(xì)胞的體外培養(yǎng),使科研人員能在體外觀察并研究原始細(xì)胞的特性和行為。

原代細(xì)胞培養(yǎng)如此重要,但培養(yǎng)起來(lái)卻苦難重重。容易污染、成活率低等問(wèn)題都困擾著科研人員。

 

本文將介紹一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟,以及一些常見的培養(yǎng)技巧和注意事項(xiàng)。

 

第一部分:準(zhǔn)備工作

在進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)之前,我們需要準(zhǔn)備以下實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和試劑:

 

無(wú)菌操作臺(tái)和培養(yǎng)箱:用于提供無(wú)菌環(huán)境,以防止細(xì)胞污染。

培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶:用于細(xì)胞的培養(yǎng)和擴(kuò)增。

培養(yǎng)基和培養(yǎng)液:包含必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子,為細(xì)胞提供適宜的生長(zhǎng)環(huán)境。

顯微鏡:用于觀察和評(píng)估細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

第二部分:原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)

 

組織收集:從動(dòng)物或人體中取得待培養(yǎng)的組織,如肺、腎、皮膚等。確保收集過(guò)程無(wú)菌,并盡量迅速進(jìn)行下一步操作。

細(xì)胞分離:將組織切割成小塊,并用酶消化液(如胰蛋白酶、膠原酶等)進(jìn)行細(xì)胞的分離。注意避免酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以免對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。

細(xì)胞收獲:過(guò)濾酶消化液,將細(xì)胞懸浮液離心分離細(xì)胞。去除上清液,用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基懸浮細(xì)胞。

細(xì)胞培養(yǎng):將細(xì)胞懸浮液均勻分布在無(wú)菌培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,加入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基。確保培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的表面干凈,并避免細(xì)胞過(guò)度密集。

細(xì)胞培養(yǎng)條件:將培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶放置于恒溫培養(yǎng)箱中,溫度通常為37攝氏度。同時(shí),保持培養(yǎng)基的穩(wěn)定性和合適的濕度。

 

第三部分:培養(yǎng)技巧與注意事項(xiàng)

 

避免細(xì)胞污染:在操作過(guò)程中,務(wù)必保持無(wú)菌操作,使用無(wú)菌試劑和器具,并經(jīng)常對(duì)培養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行消毒。定期檢查細(xì)胞培養(yǎng)是否受到細(xì)菌、真菌或其他污染物的污染。

培養(yǎng)基的更換:定期更換培養(yǎng)基,以提供新鮮的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和細(xì)胞生長(zhǎng)因子。根據(jù)細(xì)胞類型的需求,可以選擇使用不同的培養(yǎng)基和添加劑。

細(xì)胞傳代:當(dāng)細(xì)胞達(dá)到合適的密度時(shí),可以進(jìn)行細(xì)胞傳代,將細(xì)胞移植到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中。注意傳代過(guò)程中的細(xì)胞數(shù)目和均勻性。

細(xì)胞凋亡與分化:在長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中,一些原代細(xì)胞可能會(huì)發(fā)生凋亡或分化。根據(jù)研究需要,可以添加適當(dāng)?shù)囊蜃踊蚋淖兣囵B(yǎng)條件來(lái)控制細(xì)胞的凋亡和分化。

 

原代細(xì)胞的培養(yǎng),需要選擇一款高品質(zhì)的胎牛血清,無(wú)污染、低內(nèi)毒素、富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清,通過(guò)各項(xiàng)嚴(yán)格的無(wú)菌檢測(cè)、內(nèi)毒素≤3EU/ml、精選自5-8月齡牛胚胎,澳洲血源,為原代細(xì)胞培養(yǎng)提供保障。


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