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CRISPR技術應用及成功的關鍵點,PCR Clean™助力科研

更新時間:2023-09-23  |  點擊率:457

CRISPR是原核生物基因組內,一段短的重復序列,天然存在于細菌和古細菌中。在病毒和細菌的“進化斗爭史"過程中,病毒可以把自身的基因整合到細菌中,進一步利用細菌的胞內“工具",幫助自己完成基因的復制過程;而細菌為了將病毒入侵帶來的非己基因清除,進化出CRISPR-Cas9系統(tǒng)。利用該系統(tǒng),細菌把病毒基因從自己的基因組上剪切掉。從整個過程來看,CRISPR-Cas9系統(tǒng)是細菌的“免疫系統(tǒng)",是抵抗病毒等外源遺傳物質入侵的一種獲得性免疫系統(tǒng)。

 

CRISPR-Cas9系統(tǒng)包含guide RNA,也被稱為single guide RNAsgRNA,以及有核酸內切酶活性的Cas 9蛋白。

 

其中sgRNA包含了與目標DNA上特定基因序列互補的一段RNA序列,以及用于識別Cas9的一段序列。Cas9是一種酶,它充當CRISPR系統(tǒng)的剪刀"。Cas9能夠被程序性地引導到目標DNA上,并在特定的DNA序列位置切割DNA鏈。

 

在實驗過程中,將sgRNACas9蛋白結合,形成一個復合物。這個復合物能夠通過sgRNA的序列精確定位到目標基因的位置,并引導Cas9切割目標DNA。一旦DNA被切割,細胞的自身修復機制會介入,修復DNA損傷。DNA修復過程通常涉及兩種主要機制。非同源末端連接(non-homologous end joining,NHEJ)通常導致隨機的插入或刪除DNA片段,從而引起基因突變。同源重組(homology-directed repairHDR)允許精確地插入新的DNA序列,實現(xiàn)精確的基因編輯。

 

CRISPR的成功應用,有諸多關鍵點,其中一項,就是對于實驗環(huán)境中,核酸污染的控制。在PCR實驗室中,DNA污染很難清除。即使只有一個污染的DNA分子被檢測到,也會使整個PCR檢測過程出現(xiàn)誤差。為確保PCR試驗數(shù)據(jù)準確,預防DNARNA交叉污染,PCR實驗室大多會常備DNA/RNA污染清除劑。德國MB公司生產(chǎn)的PCR Clean™,可有效地降解大多數(shù)表面上(輕質金屬或有色金屬除外)的擴增子,質粒或基因組DNARNA。該產(chǎn)品還能有效地去除DNA酶和RNA酶。使用便捷,可直接噴灑在物體表面。保護實驗人員,避免接觸DNA污染。非堿性,無致癌性,成分安全。

 


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