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如何高效清除細(xì)胞中的支原體污染?

更新時(shí)間:2024-07-06  |  點(diǎn)擊率:599

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,支原體污染是一個(gè)常見且棘手的問題。支原體是一種介于細(xì)菌和病毒之間的原核生物,形態(tài)多樣,沒有細(xì)胞壁,且能夠直接穿過常規(guī)的除菌濾膜,因此極易造成細(xì)胞培養(yǎng)污染。支原體污染不僅會(huì)影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和代謝,還可能改變細(xì)胞的基因表達(dá),干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

 

一般情況下,細(xì)胞感染支原體,我們建議直接丟棄并對(duì)環(huán)境進(jìn)行消毒處理,但總有一些特殊情況,導(dǎo)致我們不能丟棄辛苦培養(yǎng)的細(xì)胞,這時(shí)就可以派細(xì)胞用支原體祛除試劑上場(chǎng)了。

 

1、對(duì)于已發(fā)生支原體污染的細(xì)胞,不愿隨意丟棄,希望繼續(xù)培養(yǎng)時(shí),可選擇Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑(貨號(hào):13-0050/13-0150)。

 

如已轉(zhuǎn)染或大量擴(kuò)增的細(xì)胞等情況,需要對(duì)已被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行拯救。使用含有復(fù)合抗生素成分的Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑,可以抑制支原體蛋白和DNA合成,同時(shí)對(duì)細(xì)菌和真菌也有抑制作用。

 

先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細(xì)胞,再使用加了Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞,按照使用說明進(jìn)行操作,使用Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑培養(yǎng)4代后,細(xì)胞中的支原體即可祛除。

 

懸浮沖洗法及試劑使用方法:

1)消化細(xì)胞:將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中的細(xì)胞消化下來。

2離心:將消化好的細(xì)胞寄培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中,進(jìn)行常規(guī)離心。

3清洗細(xì)胞:棄上清后,用無菌PBS輕柔吹打清洗細(xì)胞。

4)重復(fù)清洗:將PBS和細(xì)胞的混合物進(jìn)行低速離心,棄上清并重復(fù)清洗3.

5)重新培養(yǎng):最后一次清洗結(jié)束后,棄掉PBS上清液,加入含有Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑的新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),4代后,細(xì)胞中的支原體即可祛除。

 

 

2、對(duì)于無法長(zhǎng)期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液,則可以使用德國MB公司的Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑(貨號(hào): 10-0200/ 10-0500/ 10-1000)。

 

該試劑含有「治療液」和「鞏固防護(hù)液」?!钢委熞骸箒碜钥莶輻U菌提取物,可特異性地與支原體膜結(jié)合,改變支原體膜通透性,從而使支原體在2-3小時(shí)內(nèi)破潰死亡;「鞏固防護(hù)液」加入培養(yǎng)基,后續(xù)培養(yǎng)一個(gè)月,細(xì)胞將會(huì)清除支原體的污染,確切有效。

 

使用方法:

1)細(xì)胞重新傳代時(shí),用含Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑、5%FBS的的培養(yǎng)基替換原有培養(yǎng)基,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

2)孵育培養(yǎng)2-3小時(shí)。

3)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液。

4)用不含Mynox®的正常培養(yǎng)基(原始培養(yǎng)條件)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),傳代3-4次。

5)可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體檢測(cè),觀察細(xì)胞狀態(tài)。

 


 

3、對(duì)于可以培養(yǎng)超過一個(gè)月的珍貴細(xì)胞株,如果需要對(duì)其進(jìn)行祛除支原體的處理,可以使用德國MB公司的Mynox® Gold珍貴細(xì)胞株支原體清除試劑(貨號(hào):10-0201/ 10-0501/ 10-1001)。

 

該試劑分為直接殺除+鞏固防護(hù)兩步處理,祛除支原體的同時(shí),可進(jìn)一步在后續(xù)培養(yǎng)中鞏固清除效果,防止支原體卷土重來"。

 

使用方法:

1)治療液與含5%FBS的培養(yǎng)及混合

2)將混合后的治療液添加至培養(yǎng)皿中

3)將接種細(xì)胞

4)培養(yǎng)細(xì)胞至80%-90%匯合后,進(jìn)行傳代

5)傳代的同時(shí)加入鞏固液

重復(fù)(4)(5)兩次

6)在無Mynox® Gold的情況下傳代

7)用Venor® Gem支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)



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