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DdmDE系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是什么?

更新時(shí)間:2024-07-20  |  點(diǎn)擊率:371

基因編輯技術(shù)是十分重要的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行嚴(yán)格的的控制,防治雜質(zhì)核酸污染。德國(guó)MB公司生產(chǎn)的PCR Clean,即用型噴霧試劑,可以清除實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的核酸污染。

 

DdmDE系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是理解其質(zhì)粒消除機(jī)制的關(guān)鍵。根據(jù)當(dāng)前的研究,DdmDE系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)可以詳細(xì)描述如下:

 

一、系統(tǒng)組成

DdmDE系統(tǒng)由兩個(gè)主要組件組成:DdmDDdmE。

 

DdmD:一種解旋酶-核酸酶融合蛋白,具有降解質(zhì)粒DNA的能力。

DdmE:一種DNA引導(dǎo)的原核生物ArgonautepAgo)蛋白,負(fù)責(zé)識(shí)別并靶向質(zhì)粒DNA。

二、DdmD的結(jié)構(gòu)

自抑制二聚體結(jié)構(gòu):DdmD在未與DdmE結(jié)合時(shí),以自抑制的二聚體形式存在。這種自抑制狀態(tài)確保了DdmD在不需要時(shí)不會(huì)非特異性地降解DNA。

解旋酶和核酸酶結(jié)構(gòu)域:DdmD包含N端超家族2SF2)解旋酶結(jié)構(gòu)域和CPD-(D/E)XK核酸酶結(jié)構(gòu)域。這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域協(xié)同工作,解旋DNA雙鏈并切割單鏈DNA

單粒子冷凍電鏡(cryo-EM)解析:通過(guò)cryo-EM技術(shù),研究人員確定了DdmD二聚體的原子結(jié)構(gòu),揭示了其催化活性的關(guān)鍵機(jī)制。

三、DdmE的結(jié)構(gòu)

催化失活、DNA引導(dǎo)的pAgoDdmE是一種催化失活的pAgo蛋白,它使用短DNA片段(<15 nt)作為向?qū)?lái)靶向質(zhì)粒DNA。與其他長(zhǎng)pAgo蛋白不同,DdmE缺乏內(nèi)切酶活性,因此需要通過(guò)DdmD來(lái)實(shí)現(xiàn)DNA切割。

結(jié)構(gòu)域:DdmE具有的結(jié)構(gòu)域,這有助于其穩(wěn)定地與DNA向?qū)ЫY(jié)合,并精確識(shí)別靶標(biāo)DNA

DdmD的相互作用:當(dāng)DdmEDNA結(jié)合時(shí),會(huì)觸發(fā)DdmD二聚體的解體,并將單體DdmD加載到非靶標(biāo)DNA鏈上。這種相互作用是DdmDE系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒降解的關(guān)鍵步驟。

四、DdmDE復(fù)合物的結(jié)構(gòu)

異源二聚體復(fù)合物:在體內(nèi)突變研究和體外實(shí)驗(yàn)中,研究人員發(fā)現(xiàn)DdmDE復(fù)合物以異源二聚體的形式存在。其中,DdmEgDNA-tDNA雙鏈結(jié)合,而DdmD與移位的非靶DNAntDNA)鏈結(jié)合。

DNA引導(dǎo)的靶向和降解:DdmE使用DNA向?qū)О邢蛸|(zhì)粒DNA后,DdmD被招募到非靶標(biāo)DNA鏈上,并通過(guò)ATP驅(qū)動(dòng)的解旋和切割過(guò)程降解質(zhì)粒DNA

五、結(jié)論

DdmDE系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)揭示了其如何通過(guò)DdmEDNA引導(dǎo)和DdmD的解旋酶-核酸酶協(xié)同作用來(lái)實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒的靶向和降解。這一發(fā)現(xiàn)不僅為理解原核生物基因組防御系統(tǒng)提供了新的視角,也為未來(lái)基因編輯和抗菌治療工具的開(kāi)發(fā)提供了潛在的靶點(diǎn)。


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