培養(yǎng)基的滅菌方法

1、高壓蒸汽滅菌：

高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛(ài)制備過(guò)程中混入各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時(shí)一般是在0.105MPa壓力下，溫度121℃時(shí)，滅菌15~30min即可。消毒時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，也不能超過(guò)規(guī)定的壓力范圍，否則有機(jī)物質(zhì)特別是維生素類(lèi)物質(zhì)就會(huì)在高溫下分解，失去營(yíng)養(yǎng)作用，也會(huì)使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色，甚至難以凝固。將蒸餾水或自來(lái)水裝在三角瓶中，裝水量一般不超過(guò)瓶的2/3，用牛皮紙或硫酸紙包扎封口，然后放入高壓鍋中滅菌后即為無(wú)菌水。 滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)3d，若無(wú)污染現(xiàn)象，則證明滅菌是*的，可以使用。暫時(shí)不用的培養(yǎng)基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應(yīng)在1周內(nèi)用完，其他培養(yǎng)基最多也不要超過(guò)1個(gè)月。

2、過(guò)濾滅菌：

一些植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及有機(jī)物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇熱容易分解，不能與培養(yǎng)基一起進(jìn)行高溫滅菌，而要使用細(xì)菌過(guò)濾器濾去其中的雜菌。細(xì)菌過(guò)濾器與濾膜（孔徑0.45微米）使用之前要先進(jìn)行高壓滅菌。過(guò)濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中，若為液體培養(yǎng)基，可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時(shí)加入；若為固體培養(yǎng)基，必須在培養(yǎng)基凝固之前（50-60℃）加入，振蕩使溶液與其他成分混合均勻。

處理細(xì)胞培養(yǎng)工作區(qū)域的支原體

這里的工作區(qū)域包括實(shí)驗(yàn)臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱（水槽除外）、液氮罐、移液器、門(mén)把手等細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境。

使用德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體祛除噴霧或濕巾（品名：Mycoplasma-off™），可在5-10分鐘清除支原體，高效快速，操作方便。

產(chǎn)品特點(diǎn)及原理：

1）快速有效

噴霧劑和濕巾中含有支原體專(zhuān)用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。

與傳統(tǒng)的化學(xué)試劑熏蒸方法相比，更加安全；與傳統(tǒng)酒精處理、紫外線照射方法相比更有效！

2）廣譜抗菌

不僅能去除支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3）無(wú)腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無(wú)腐蝕性和致癌性成分。

4）操作簡(jiǎn)便

即用型消毒液，可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

使用方法及步驟：

噴霧劑:

注：對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)箱，內(nèi)部噴灑支原體祛除噴霧或用濕巾擦拭后，應(yīng)打開(kāi)箱門(mén)通風(fēng)至少1小時(shí)。如培養(yǎng)箱帶熱滅活功能，可開(kāi)啟該功能以替代風(fēng)干。

濕巾:

對(duì)于移液器，門(mén)把手，電子設(shè)備等，可使用支原體祛除濕巾。擦拭后，應(yīng)讓其被消毒物體的表面保持濕潤(rùn)，再讓其自然風(fēng)干。

培養(yǎng)箱水槽和水浴鍋中預(yù)防支原體污染的方法

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋經(jīng)常會(huì)有支原體以及各種細(xì)菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時(shí)，水槽中的水源即會(huì)成為細(xì)胞污染的重要來(lái)源。

保持水槽的潔凈，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的順利進(jìn)行非常重要。

推薦全球眾多實(shí)驗(yàn)室日常都在使用德國(guó)MB公司生產(chǎn)的Water Shield支原體污染防護(hù)劑（水槽用）。Water Shield可持續(xù)作用四周，使水源避免受到支原體、細(xì)菌、酵母、霉菌和孢子的污染。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1）長(zhǎng)效。Water Shield含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑，不易揮發(fā)，可持續(xù)作用4周。

2）安全。不含醛類(lèi)或疊氮化物，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害。

3）廣譜。預(yù)防支原體、細(xì)菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4）方便。Water Shield按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

5）不產(chǎn)生水垢。

操作步驟：

1）Water Shield和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

2）Water Shield按1:200比例使用，例如：1000ml蒸餾水+5ml Water Shield，或10L蒸餾水+50ml Water Shield。

3）4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield。

注意事項(xiàng)：

避免吸入。眼睛接觸或長(zhǎng)時(shí)間皮膚接觸可能會(huì)產(chǎn)生刺激性。因而，使用試劑時(shí)應(yīng)戴上護(hù)目鏡和一次性手套。一旦皮膚接觸，應(yīng)用大量水沖洗。

Water Shield對(duì)玻璃、陶瓷、塑料、橡膠、鋼制品、貴金屬和其他金屬安全性良好