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葉酸測(cè)定培養(yǎng)基菌株活化及菌懸液制備方法及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-05-16  |  點(diǎn)擊率:785
  葉酸測(cè)定培養(yǎng)基葉酸是鼠李糖乳桿菌生長所需的營養(yǎng)素,在一定控制條件下,將鼠李糖乳桿菌液接種至含有式樣液的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)一段時(shí)間后測(cè)定透光率(或吸光度值),根據(jù)葉酸含量與透光率(或吸光度值)的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出試樣中葉酸的含量。
  葉酸測(cè)定培養(yǎng)基的菌株活化及菌懸液制備
  1.將鼠李糖乳桿菌轉(zhuǎn)接至瓊脂培養(yǎng)基中,在37℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20h-24h,連續(xù)傳中2代-3代。
  2.實(shí)驗(yàn)前一天,取2mL葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液與4mL葉酸測(cè)定用培養(yǎng)液混勻,分裝至2支5mL離心管中,于121℃高壓滅菌15min即為種子培養(yǎng)液。待冷卻后用接種環(huán)將活化的菌株轉(zhuǎn)種至2支種子培養(yǎng)液中,于37℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20h-24h。將種子培養(yǎng)液混勻,無菌操作下吸取0.5mL轉(zhuǎn)種至另2支已消毒但不含葉酸的培養(yǎng)液中,37℃±1℃培養(yǎng)6h,振蕩混勻,制成接種液,立即使用。
  注意事項(xiàng):制備菌株過程需注意嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作,防止污染雜菌。
  葉酸測(cè)定培養(yǎng)基的樣品處理
  1.直接提取法:稱取固體試樣或液體試樣0.5g-2g(精確到0.001g),轉(zhuǎn)入100mL錐形瓶中,加入80mL氫氧化鈉乙醇溶液,超聲振蕩2h-4h至試樣*溶解或分散,用水定容至刻度。
  2.酶解提取法:稱取適量試樣(精確到0.001g),轉(zhuǎn)至100mL錐形瓶中,加入30mL磷酸緩沖液,振搖5min后,于121℃高壓水解15min;待試樣冷卻至室溫,加入1mL雞胰腺溶液(含有蛋白質(zhì)、淀粉的試樣需另加入1mL蛋白酶-淀粉酶液)混合,加入3滴-5滴甲苯后,置于37℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)酶解16h-20h,取出轉(zhuǎn)入100mL容量瓶,加水定容至刻度,過濾。
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